鸡贫血病毒凋亡素基因的可溶性融合表达及抗肿瘤活性分析

• 作者: 冀君 冷超粮 刘晓 史鸿飞 姚伦广 朱晨晨 许鑫 阚云超
• 来源期刊: 中国生物工程杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 凋亡素 鸡贫血病毒 融合伴侣 高效可溶性表达 活性分析
• 年，卷（期）: 2017,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 26-32
• 页数: 7页
• 分类号: Q789
• 语种: 中文
• DOI: 10.13523/j.cb.20170205

摘要

为获得高效可溶表达的鸡贫血病毒凋亡素基因(CA V-Apoptin),根据大肠杆菌密码子偏爱性优化CA V-Apoptin基因序列,将其连接到含msyB伴侣基因的pBCX载体上,转化至大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达,经SDS-PAGE鉴定后应用镍柱亲和层析纯化蛋白质,采用显微镜观察、CCK-8实验与DNA ladders测定其抗肿瘤细胞的活性.结果显示,成功构建大肠杆菌表达载体pBCX-CA V-Apoptin,在37℃正常培养条件下的大肠杆菌中得到大量可溶性表达产物,融合蛋白质分子量大小约为42 kDa,50 ml菌液即可获得1.5 mg左右的纯化重组蛋白,CCK-8实验结果显示纯化后的重组蛋白作用36 h后可对套氏淋巴瘤JEKO-1、REC-1细胞生长产生超过60％的抑制率;显微镜观察与DNA ladder实验证明重组蛋白可诱导JEKO-1、REC-1细胞的凋亡,对HUVEC没有诱导凋亡的作用.免疫印迹分析表明重组凋亡素对JEKO-1细胞诱导了Caspase-3的激活,而对Caspase-8的表达没有影响.研究表明融合蛋白msyB-CAV-Apoptin可达到高效可溶表达,且表达产物具有特异抗肿瘤活性.