赭曲霉甾体11α-羟化酶基因AOH在毕赤酵母中的表达及功能分析

• 作者: 刘晓光 曹通 王正祥 路福平 郭凯 黄琳琳
• 来源期刊: 天津科技大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 赭曲霉 11α-左旋乙基甾烯双酮 毕赤酵母
• 年，卷（期）: 2017,（5）
• 所属期刊栏目: 食品与生物技术
• 页码范围: 34-38,78
• 页数: 6页
• 分类号: Q786
• 字数: 3594字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13364/j.issn.1672-6510.20160130

摘要

11α-羟基左旋乙基甾烯双酮(11α-OH-GD)是生产高效避孕药去氧孕烯的关键中间体.丝状真菌赭曲霉(Aspergillus ochraceus)TCCC41060可以转化左旋乙基甾烯双酮(GD)形成11α-OH-GD,但该转化反应特异性低,副产物偏高,限制了其工业应用.为了研究赭曲霉转化GD特异性偏低的机理,本文克隆了赭曲霉11α-羟化酶基因AOH并构建了表达载体pPIC3.5,K-AOH,获得了重组毕赤酵母菌株.聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)与免疫印迹实验(Western blot)分析表明,AOH重组蛋白相对分子质量为6.12×104,与预测结果一致.对转化产物进行薄层色谱(TLC)和高效液相色谱(HPLC)分析结果显示,AOH重组菌株能够转化GD,形成目标产物11α-OH-GD以及3种副产物.以上结果表明:AOH基因编码的甾体11α-羟化酶对底物GD转化反应的特异性较差.