一种基于多重PCR的人类线粒体基因组高通量测序方法

• 作者: 万春玲 周代占 孙嘉仪 张娟 杨超 胡晓雯 贺林
• 来源期刊: 中国科学（生命科学）
• 关键词: 人类线粒体基因组 多重PCR 二代测序
• 年，卷（期）: 2017,（4）
• 所属期刊栏目: 论文
• 页码范围: 396-402
• 页数: 7页
• 语种: 中文
• DOI: 10.1360/N052017-00063

摘要

人类线粒体基因组DNA(mtDNA)是一个16569 bp的双链闭合环状DNA分子,具有母系遗传、多拷贝、高异质性及高变异率等特点,是研究人类遗传和进化上广泛使用的分子标记.近几年,高通量测序技术的出现,使得在短时间内准确测定mtDNA序列成为可能;但目前常用的高通量测序建库方法操作复杂、研究费用相对较高.基于多重PCR扩增的测序方法具有高效率、高灵敏度、低成本的特点,因而适用于大规模线粒体基因组的变异检测分析.利用73个相互重叠的扩增子通过多重PCR方法来扩增中国人的线粒体全基因组,在扩增片段两端连接特定的接头序列,然后在IlluminaHiSeqXTen平台上进行高通量测序.对获得的测序数据分析发现,mtDNA每个位点的测序深度均达到2000×以上;当测序深度为l00×时,所有样本的序列覆盖度都达到100％;数据质量适用于后续的变异检测分析.利用本研究建立的基于多重PCR的二代测序方法无需片段化即可直接上机测序,在复杂遗传病的研究中有着广泛的应用前景.