犬圆环病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立

• 作者: 孙文超 张红云 张萍 曹亮 曹慧慧 温树波 肖朋朋 解长占 赵冠宇 郑敏 金宁一 靖杰 韦显凯 韩继成 鲁会军
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 犬圆环病毒 SYBR GreenⅠ 实时荧光定量PCR
• 年，卷（期）: 2017,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 6-10
• 页数: 5页
• 分类号: S852.659.2
• 字数: 3283字
• 语种: 中文

摘要

犬圆环病毒(DogCV)是圆环病毒科新发现的圆环病毒,旨在建立犬圆环病毒实时荧光定量PCR检测方法.试验用PCR方法克隆犬圆环病毒ORF2基因保守区域,构建标准阳性质粒pClon007-ORF2.以标准阳性质粒pClon007-ORF2为模板对荧光定量PCR反应体系进行优化.结果表明,所建立的方法Ct值与标准品在4.67×109 copies/μL～4.67×103 copies/μL范围内呈良好的线性关系,相关系数为0.998,斜率为-3.445.该方法检测灵敏度为4.67×101 copies/μL.该方法对狂犬病病毒、犬细小病毒、犬瘟热病毒、犬副流感病毒、犬腺病毒2型等犬常见病原的检测均无交叉反应;所有稀释度标准品模板均在83.35℃出现窄的特异性熔解峰.临床样品检测表明,所建立的实时荧光定量PCR对犬圆环病毒的阳性检测率为12.50％(4/32).