重组腺病毒介导的β-神经生长因子基因转染大鼠内皮祖细胞的实验研究

• 作者: 刘鹏 吴东进 彭长亮 朱冬昀 马腾 高春正
• 来源期刊: 中国矫形外科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 内皮祖细胞 神经生长因子 腺病毒 转染 感染复数 大鼠
• 年，卷（期）: 2017,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 152-157
• 分类号: R318
• 语种: 中文
• DOI: 10.3977/j.issn.1005-8478.2017.02.12

摘要

[目的]探究携带β-神经生长因子(β-NGF)基因的重组腺病毒转染大鼠骨髓源内皮祖细胞(EPCs)的最佳感染复数(MOI),并从基因转录和蛋白合成两个水平上观察转染后EPCs对β-NGF基因的表达,探讨其对脊髓损伤后神经元细胞微环境的影响.[方法]密度梯度离心法分离、全骨髓贴壁法培养大鼠骨髓源EPCs,免疫荧光法检测EPCs特异性表面分子CD34、CD133和VEGFR-2的表达.用不同MOI值的携带β-NGF基因和绿色荧光蛋白基因(GFP)的重组腺病毒转染EPCs,确定最佳的MOI值.用携带β-NGF基因的重组腺病毒转染的细胞为β-NGF基因组,用空载的重组腺病毒转染的细胞为空载组,未转染的细胞为空白组.RT-PCR法、Western blot法和ELISA法检测β-NGF的表达.[结果]成功分离、培养出大鼠骨髓源EPCs,特异性表面分子CD34、CD133和VEGFR-2经鉴定呈阳性表达;携带β-NGF基因的重组腺病毒转染EPCs最佳的MOI为70;转染成功的细胞β-NGF基因在mRNA和蛋白两个不同的水平上表达都升高,并持续向细胞外分泌.[结论]携带β-NGF基因的重组腺病毒可成功转染EPCs,成功转染β-NGF基因的细胞能持续向细胞外分泌有活性的β-NGF蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	高春正	山东大学第二医院脊柱外科	16	41	4.0	6.0
2	吴东进	山东大学第二医院脊柱外科	9	18	2.0	4.0
3	彭长亮	山东大学第二医院脊柱外科	5	4	1.0	1.0
4	刘鹏	山东大学第二医院脊柱外科	39	415	11.0	19.0
5	马腾	山东大学第二医院脊柱外科	5	11	2.0	3.0
6	朱冬昀	山东临邑县人民医院骨科	1	0	0.0	0.0