独行菜法尼基焦磷酸合酶基因的克隆与原核表达

• 作者: 付小蝶 冯卫生 匡海学 赵乐 郑晓珂 马利刚
• 来源期刊: 河南农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 独行菜 法尼基焦磷酸合酶 基因克隆 序列分析 原核表达
• 年，卷（期）: 2017,（9）
• 所属期刊栏目: 园艺·林学
• 页码范围: 92-97
• 页数: 6页
• 分类号: S567
• 字数: 3441字
• 语种: 中文
• DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2017.09.017

摘要

从独行菜(Lepidium apetalum)中克隆强心苷合成途径的法尼基焦磷酸合酶(FPS)基因,并在大肠杆菌中表达,为进一步研究独行菜强心苷的合成途径提供参考.分析前期获得的独行菜幼苗转录组数据,选择其中注释为FPS且具有完整开放阅读框的序列,从独行菜叶片cDNA中通过PCR克隆该序列,并进行序列分析.结果表明,克隆得到独行菜FPS基因的cDNA序列,GenBank登录号KY366218,命名为LaFPS.序列长度为1 332 bp,含有1 161 bp的开放阅读框,推测编码386个氨基酸.LaFPS蛋白可能不含跨膜结构,定位于线粒体中,含有聚异戊二烯合成酶结构域.LaFPS蛋白氨基酸序列与拟南芥(Arabidopsis thaliana)FPS1蛋白相似性高达92％,进化树分析结果表明,LaFPS与同为十字花科的拟南芥FPS1、遏蓝菜(Noccaea caerulescens)FPS1、高山南芥(Arabis alpina)FPS亲缘关系最近.构建的载体pET-32a-LaFPS可在大肠杆菌中成功诱导表达.表明成功克隆了独行菜FPS基因,并建立了其原核表达体系.