独行菜LaMCT基因的克隆、序列分析与原核表达

• 作者: 冯卫生 李晓阳 赵乐 郑晓珂 马利刚
• 来源期刊: 广西植物
• 学科: 生物学
• 关键词: 独行菜 MCT 基因克隆 序列分析 原核表达
• 年，卷（期）: 2016,（10）
• 所属期刊栏目: 植物生理与分子生物学
• 页码范围: 1225-1231
• 页数: 7页
• 分类号: Q943.2
• 字数: 5722字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11931/guihaia.gxzw201510007

摘要

强心苷作为药用植物独行菜( Lepidium apetalum)的活性成分,其化学和药理学研究已有良好的基础,但其生物合成途径目前仍不清楚。该研究以独行菜幼苗为材料,通过分析独行菜转录组数据,设计特异性引物,PCR扩增得到了强心苷生物合成MEP途径的关键酶2-C-甲基赤藓醇-4-磷酸胞苷酰转移酶( MCT)基因的开放阅读框( ORF),命名为LaMCT( Genbank注册号KT832554),并进行序列分析和原核表达。序列分析结果表明：LaMCT基因ORF全长为912 bp,编码304个氨基酸。亚细胞定位和保守结构域分析结果表明：LaMCT蛋白位于叶绿体中,不含信号肽,没有跨膜区,含有类异戊二烯合成酶保守结构域( isoprenoid synthase domain)。系统进化树结果表明：LaMCT蛋白与拟南芥的MCT蛋白具有94％的序列相似性,亲缘关系较近。通过构建pET-32a-LaMCT原核表达载体,成功在大肠杆菌BL21( DE3)菌株中诱导表达LaMCT重组蛋白,并得到了纯化的LaMCT重组蛋白。该研究首次从独行菜中克隆了LaMCT基因,建立其稳定的原核表达体系,为LaMCT蛋白抗体的制备以及研究LaMCT基因在独行菜强心苷类化合物生物合成途径中的功能奠定了基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	冯卫生	河南中医学院药学院	210	3004	32.0	45.0
3	郑晓珂	河南中医学院药学院	177	2007	27.0	38.0
5	赵乐	河南中医学院药学院	45	96	6.0	8.0
7	马利刚	河南中医学院药学院	34	65	5.0	6.0
17	李晓阳	河南中医学院药学院	1	2	1.0	1.0