绿色荧光蛋白GFP多克隆抗体的制备及在多种细胞中的特异性鉴定

• 作者: 孟德梅 樊振川 王晶 胡贺贺 董彬
• 来源期刊: 天津科技大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 原核表达 蛋白纯化 多克隆抗体 免疫印迹
• 年，卷（期）: 2017,（2）
• 所属期刊栏目: 食品与生物技术
• 页码范围: 7-12
• 页数: 6页
• 分类号: Q786
• 字数: 4598字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13364/j.issn.1672-6510.20160202

摘要

绿色荧光蛋白是当前在生物及生物医学研究当中应用最为广泛的一种荧光标记蛋白.为开发一种高灵敏度、高特异性以及简单经济的GFP多克隆抗体,并使之适用于在跨物种细胞里表达的GFP蛋白进行检测,本文利用gfp基因cDNA全序列分别构建了带有6×His和GST标签的原核表达载体pET28A-gfp和pGEX-2T-gfp,并将其转入大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)细胞进行诱导表达,而后进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)表达鉴定,分别获得了相对分子质量为2.6×104和5.2×104的重组6×His/GST-GFP融合蛋白.将亲和纯化的6×His-GFP融合蛋白免疫新西兰大白兔,采集第5次免疫后血清用ELISA测定效价为1﹕32,000.抗血清依次经Protein A亲和纯化和GST-GFP抗原抗体纯化后,用免疫印迹实验(Western blot)方法检测抗体特异性,结果表明制备的多克隆抗体能很好地识别在莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii)、HEK293细胞和大肠杆菌中表达的GFP,对继续开展GFP相关研究具有重要意义.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	董彬	食品营养与安全教育部重点实验室天津科技大学食品工程与生物技术学院	2	11	2.0	2.0
2	胡贺贺	食品营养与安全教育部重点实验室天津科技大学食品工程与生物技术学院	1	3	1.0	1.0
3	王晶	食品营养与安全教育部重点实验室天津科技大学食品工程与生物技术学院	1	3	1.0	1.0
4	孟德梅	食品营养与安全教育部重点实验室天津科技大学食品工程与生物技术学院	2	11	2.0	2.0