兔抗鼠IL-12p35多克隆抗体的制备及应用

• 作者: 刘诗梦 刘鑫 康巧珍 江慧 汲振余 王婷 王小龙 门颖丽
• 来源期刊: 南昌大学学报(理科版)
• 学科: 生物学
• 关键词: IL-12a IL-12p35多克隆抗体 LPS IFN-γ
• 年，卷（期）: 2017,（1）
• 页码范围: 72-76
• 页数: 5页
• 分类号: Q785
• 字数: 3865字
• 语种: 中文

摘要

利用分子克隆方法构建重组载体pGEX-4T-1-IL-12a,转化BL21(DE3),经IPTG诱导表达,谷胱甘肽琼脂糖凝胶4B亲和层析柱纯化后,获得重组融合蛋白GST-IL-12p35.以此蛋白为免疫抗原免疫新西兰大耳白兔制备IL-12p35多克隆抗体.采用ELISA法评估抗体效价,Western blot检测抗体特异性.LPS刺激小鼠脾细胞,ELISA法检测IL-12抗体阻断后细胞培养上清中的IFN-γ的分泌量.结果:成功构建重组载体pGEX-4T-1-IL-12a,并获得重组融合蛋白GST-IL-12p35 (约48 kDa).抗原免疫新西兰大耳白兔制备IL-12p35多克隆抗体,ELISA 法测得IL-12p35多克隆抗体效价为1:256 000,Western blot证实制备的多克隆抗体能够识别结合重组蛋白.IL-12p35多克隆抗体能够有效地抑制LPS诱导的脾细胞IFN-γ的表达.