雅致放射毛霉羧肽酶Y的基因克隆、表达与酶学性质研究

• 作者: 刘中美 周哲敏 纪海兵 郭军玲
• 来源期刊: 现代食品科技
• 关键词: 雅致放射毛霉 羧肽酶Y 酶学性质
• 年，卷（期）: 2017,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 81-86,80
• 页数: 7页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13982/j.mfst.1673-9078.2017.1.013

摘要

本研究从雅致放射毛霉中克隆、表达和纯化羧肽酶Y(CPY),体外激活后检测其酶学性质.本文筛选并鉴定了一株腐乳发酵菌株,命名为雅致放射毛霉PEP001(Actinomucor elegans PEP001).以相近种族来源的真菌羧肽酶Y保守序列设计简并引物调取部分目的基因序列,利用末端扩增技术(RACE)分别获得3'与5'端基因全长,克隆获得羧肽酶Y基因,全长为1557bp,编码518aa.将其酶原(proCPY)在大肠杆菌Rosetta中重组表达,产物为包涵体;在毕赤酵母GS115中成功分泌表达proCPY,产量为151.20±10.20mg/L.通过体外激活与纯化,获得电泳纯的成熟羧肽酶Y.成熟羧肽酶Y最适pH为6.0,最适温度为45℃,在40℃下有较高稳定性,在60℃下很快失活,在pH 4.0～7.0下都有较高的稳定性.本文中雅致放射毛霉PEP001羧肽酶Y为首次报道,为进一步研究其应用打下一定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘中美		27	48	4.0	6.0
2	周哲敏		53	108	5.0	6.0
3	郭军玲		6	2	1.0	1.0
4	纪海兵		1	0	0.0	0.0