A型口蹄疫病毒1D蛋白在大肠埃希菌中的可溶性表达、纯化及电子显微镜检测

• 作者: 明胜利 杨国宇 郭婉莹 郭玉堃 郭豫杰
• 来源期刊: 解剖学报
• 学科: 农学
• 关键词: A型口蹄疫病毒 1D蛋白 铁蛋白 融合标签 可溶性 纳米颗粒 电子显微术 大肠埃希菌
• 年，卷（期）: 2017,（6）
• 所属期刊栏目: 组织学胚胎学发育生物学
• 页码范围: 726-731
• 页数: 6页
• 分类号: S855.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.16098/j.issn.0529-1356.2017.06.016

摘要

目的 本实验旨在表达出高可溶性的A型口蹄疫病毒1D蛋白,并通过电子显微镜检测,以期望形成纳米样颗粒.方法 根据A型口蹄疫病毒核酸序列,得到FMDV A/GDMM/CHA/2013株的1D蛋白基因,并进行截短和优化,共132个氨基酸;同时,从结肠弯曲杆菌(Campylobacter coli)中分离得到135个氨基酸的铁蛋白(Fn)基因片段,将A型口蹄疫病毒1D蛋白与铁蛋白串联,设计并合成了口蹄疫病毒1D蛋白-铁蛋白片段,命名为CcFnt166AS.构建了CcFnt166AS融合Grifin、GST、MBP、Sumo、Thioredoxin、γ-crystallin、ArsC、PpiB、CeHSP17等9种不同可溶性标签的表达重组载体.分别转化至大肠埃希菌BL21(DE3)中,异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,SDS-PAGE电泳对融合蛋白的可溶性表达进行检测,筛选出高可溶性表达的CcFnt166AS融合蛋白.重组蛋白通过Ni-NTA Agarose亲和纯化,进行电子显微镜检测.结果 成功构建9种CcFnt166AS表达载体;9个标签中,MBP与CcFnt166AS蛋白相融合的可溶表达效果最好,并获得了高纯度的MBP-CcFnt166AS重组蛋白质;电子显微镜结果显示,MBP-CcFnt166AS形成了纳米样颗粒.结论 本实验建立了稳定获得CcFnt166AS重组蛋白质的方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨国宇	河南农业大学农业部动物生化与营养重点开放实验室	174	1205	16.0	28.0
2	郭豫杰	河南农业大学农业部动物生化与营养重点开放实验室	55	124	5.0	8.0
3	明胜利	河南农业大学农业部动物生化与营养重点开放实验室	5	6	1.0	2.0
4	郭婉莹	河南农业大学农业部动物生化与营养重点开放实验室	6	9	2.0	3.0
5	郭玉堃	河南农业大学农业部动物生化与营养重点开放实验室	5	9	2.0	3.0