口蹄疫病毒结构蛋白VP1基因的克隆及其在大肠埃希氏菌中的表达

• 作者: 刘在新 杨彬 胡永浩 谢庆阁
• 来源期刊: 中国兽医科技
• 学科: 农学
• 关键词: 口蹄疫病毒 结构蛋白 VP1基因 克隆 表达
• 年，卷（期）: 2003,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 3-8
• 页数: 6页
• 分类号: S852.659.6
• 字数: 4000字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-4696.2003.03.001

摘要

利用RT-PCR技术,用包容口蹄疫病毒完整VP1基因的引物从口蹄疫分离株(China/99-2)中扩增得到一约750 bp的DNA片段,克隆后,经对该片段的核苷酸序列进行测序和同源性比较,显示其与国外同源参考序列(O1K/66)的同源性为80.44%,与国内同型参考株(HB/WH/99)的核苷酸序列的同源性达99.06%.随后以重组质粒pGEM-VP1为模板,用特异性表达引物扩增得到目的基因VP1(650 bp),对目的基因和表达载体pGEX-4T-1分别以相同的限制性内切酶酶切后构建成重组表达载体,转化宿主菌BL21(DE3)后得到重组质粒pGEX-VP1,经酶切及PCR鉴定筛选出阳性克隆,测序证明目的基因正确插入到表达载体.用IPTG诱导VP1基因的表达,收集不同时间的菌液进行SDS-PAGE电泳、Western-blotting分析检测.结果表明,结构蛋白VP1基因可在大肠埃希氏菌中表达,表达产物的分子量约为53 ku,并能被口蹄疫阳性血清所识别.经薄层扫描分析,表达蛋白约占菌体蛋白总量的20.00%.证明口蹄疫病毒结构蛋白VP1基因可在大肠埃希氏菌中高效表达,且表达产物有一定的生物学活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	谢庆阁	中国农业科学院兰州兽医研究所	62	755	16.0	24.0
2	刘在新	中国农业科学院兰州兽医研究所	47	488	11.0	21.0
3	杨彬	中国农业科学院兰州兽医研究所	10	40	4.0	6.0
4	胡永浩	甘肃农业大学动物医学院	96	391	9.0	16.0