口蹄疫病毒OH株结构蛋白基因VP1的克隆与表达

• 作者: 刘湘涛 吴锦艳 尚佑军 尹双辉 田宏 陈国栋 龚真莉
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 口蹄疫病毒 VP1基因 基因克隆 表达
• 年，卷（期）: 2006,（7）
• 所属期刊栏目: 微生物学
• 页码范围: 515-518
• 页数: 4页
• 分类号: S852.659.6|Q786
• 字数: 3627字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-4696.2006.07.001

摘要

采用RT-PCR方法扩增获得了O型口蹄疫病毒的主要免疫原VP1基因,将其插入pMD18 T载体进行序列分析,结果表明,所获得的基因片段含有完整的FMDV结构蛋白VP1编码区.根据表达载体pQE-Trisystem的克隆位点序列和该VP1基因片段的末端序列设计了1对表达引物,以重组pMD T-VP1阳性质粒为模板,扩增获得了VP1基因,通过酶切将其克隆至表达载体pQE-Trisystem上.经测序证实,重组表达质粒所含的外源基因VP1编码框正确无误.将重组表达质粒pQE-VP1转化至大肠埃希氏菌M15,通过IPTG诱导促使VP1基因高效表达,SDS-PAGE和Western-blot分析表明,表达产物大小与预期的结果(26 ku)一致,且具有良好的反应原性.以2 mmol/L IPTG诱导表达5 h时表达量最高,其中70%～80%的目的蛋白存在于菌体裂解后的上清中,表明外源基因VP1主要以可溶性方式表达.