登革-2型病毒一步法TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法建立

• 作者: 吕清巧 吴家红 商正玲 牟小会 程金芝 郑祎扬 韦艳 颜凤
• 来源期刊: 中国公共卫生
• 学科: 医学
• 关键词: 登革2型病毒(DENV-2) TaqMan荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR) 检测 标准品
• 年，卷（期）: 2017,（7）
• 所属期刊栏目: 检验技术
• 页码范围: 1074-1078
• 页数: 5页
• 分类号: R373.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.11847/zgggws2017-33-07-11

摘要

目的 建立一种针对登革2型病毒(DENV-2)的快速、灵敏、特异的检测方法.方法 从GenBank下载105株DENV-2病毒毒株全基因序列,应用生物软件Bioedit进行比对分析筛选出保守序列,在保守区域设计特异引物和探针,建立检测DENV-2的TaqMan荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法.结果 该方法检测灵敏度达到102 copies/μL;特异性验证中除登革2型病毒有明显扩增外,与墨累谷脑炎病毒、西尼罗病毒、蜱传脑炎病毒、登革病毒1、3、4型、黄热病毒和科萨努尔森林病毒、乙型脑炎病毒均无交叉反应.重复性实验结果表明该方法的组间和组内的变异系数(CV)均＜2％.对人工感染DENV-2的87只蚊虫标本进行比对实验,结果荧光定量RT-PCR检测出56份阳性,传统RT-PCR只检测出16份阳性,差异有统计学意义(x2=37.908,P=0.000).结论 TaqMan荧光定量RT-PCR方法检测DENV-2,特异性强、敏感性高.