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Annexin A4-EGFP融合蛋白的表达纯化及其凋亡检测能力初探
Annexin A4-EGFP融合蛋白的表达纯化及其凋亡检测能力初探
作者:
刘婧
华子春
王杰
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
膜联蛋白A4
原核表达
纯化
凋亡检测
序列比对
摘要:
膜联蛋白(annexin)是一类进化保守的多基因家族蛋白,可与细胞膜磷脂酰丝氨酸(phosphatidyl-serine,PS)结合,由于PS与许多重要疾病密切相关,具有作为药物发现新靶点的潜力,使得annexin具有良好的药物发现价值和新药研发前景.AnnexinA4(以下称A4)是膜联蛋白家族成员之一,参与多项细胞功能,如胞吐作用和凝血反应,所有这些功能与膜联蛋白可结合酸性磷脂的能力相关.目前对A4的功能尚不完全了解,获得足量的A4是深入了解A4的结构与功能的基础.为了克服传统从生物组织中提纯人源A4的方法得率不高,且较为复杂等问题,本文通过原核系统重组表达A4,以获取大量可溶性蛋白,探究其与PS的结合能力,为后续研究奠定基础.利用分子生物学的手段构建融合表达质粒pET28a-annexin A4-EGFP,大量表达、选用并比较了两种获取可溶性annexin A4-EGFP(以下称A4-EGFP)融合蛋白的纯化方法,同时检测A4-EGFP对凋亡细胞的识别能力.通过亲和层析纯化获得纯度为80%的A4-EGFP;而选用膜吸附纯化方式,最终获得了纯度达90%的蛋白.流式细胞仪检测结果显示:A4-EGFP融合蛋白可识别和标记早期凋亡细胞,其与PS亲和力为79.58±11.68nmol·L-1,与A5-EGFP和PS的亲和力同处一个数量级.本文成功实现了A4-EGFP在原核体系中的高效可溶性表达,建立了简易、高效的分离纯化方法,获得了产率高达75.2 mg·L-1的A4-EGFP,为深入研究A4的功能及其潜在的应用奠定了基础.
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文献信息
篇名
Annexin A4-EGFP融合蛋白的表达纯化及其凋亡检测能力初探
来源期刊
药学学报
学科
医学
关键词
膜联蛋白A4
原核表达
纯化
凋亡检测
序列比对
年,卷(期)
2017,(6)
所属期刊栏目
药理学
研究方向
页码范围
904-910
页数
7页
分类号
R966
字数
语种
中文
DOI
10.16438/j.0513-4870.2017-0340
五维指标
作者信息
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姓名
单位
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被引次数
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华子春
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王杰
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膜联蛋白A4
原核表达
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研究来源
研究分支
研究去脉
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期刊影响力
药学学报
主办单位:
中国药学会
中国医学科学院药物研究所
出版周期:
月刊
ISSN:
0513-4870
CN:
11-2163/R
开本:
大16开
出版地:
北京市先农坛街1号
邮发代号:
2-233
创刊时间:
1953
语种:
chi
出版文献量(篇)
5934
总下载数(次)
20
总被引数(次)
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