斑马鱼卵黄原蛋白的纯化鉴定及其2种ELISA的开发

• 作者: 李鹏 汝少国 王军 邴欣
• 来源期刊: 中国海洋大学学报（自然科学版）
• 学科: 地球科学
• 关键词: 斑马鱼 卵黄原蛋白 多克隆抗体 竞争ELISA 夹心ELISA
• 年，卷（期）: 2017,（7）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 56-62
• 页数: 7页
• 分类号: X835
• 字数: 5132字
• 语种: 中文
• DOI: 10.16441/j.cnki.hdxb.20160223

摘要

斑马鱼卵黄原蛋白(Vitellogenin,VTG)是检测环境雌激素活性的重要生物标志物.为了确定最佳的斑马鱼VTG检测方法,本研究利用纯化的斑马鱼VTG及其多克隆抗体同时建立了竞争ELISA与夹心ELISA,并比较了2种方法对VTG的敏感度与精确度.采用凝胶过滤与离子交换层析相结合的方法从17β-雌二醇暴露后的斑马鱼整体匀浆液中纯化获得了2种高分子量的糖磷脂蛋白,SDS变性电泳显示分子量为180与143 kDa的两条主带,证实纯化的蛋白为斑马鱼VTG.Western blot结果表明制备的抗血清对斑马鱼VTG具有很高的特异性,利用纯化的VTG及其多克隆抗体建立了定量斑马鱼VTG的竞争ELISA和夹心ELISA.与竞争ELISA相比,夹心ELISA不需要抗原抗体共孵育的过程,操作更加省时、简便,其工作范围为3.9～250 ng/mL,检出限约为2.2 ng/mL,组内与组间变异系数则分别为2.1～5.7和3.0～7.3,表现出更高的敏感度与精确度,推荐该方法用于环境雌激素活性的检测.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	汝少国	中国海洋大学海洋生命学院	85	802	15.0	24.0
2	王军	中国海洋大学海洋生命学院	18	100	6.0	9.0
3	邴欣		10	16	2.0	3.0
4	李鹏		5	18	3.0	4.0