EMA实时荧光PCR技术检测食品中单核增生李斯特活菌方法研究

• 作者: 占利 张云怡 张俊彦 张政 徐昌平 杨勇 梅玲玲 陈建才 陈鸿鹄
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 单增李斯特菌 活菌 叠氮溴化乙锭(EMA) 实时荧光PCR技术
• 年，卷（期）: 2017,（11）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1007-1012
• 页数: 6页
• 分类号: R378.99
• 字数: 5095字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2017.11.011

摘要

目的 利用叠氮溴化乙錠(EMA)实时荧光PCR技术,建立直接检测食品中单增李斯特活菌的方法.方法 根据单核李斯特菌inlA基因设计特异性引物和探针.用不同EMA浓度、不同光照次数优化样品前处理条件.用平板计数法验证该方法的检出限及对死菌的抑制率.用35株单增李斯特菌、25株非单核李斯特菌、92株非李斯特菌验证该方法特异性.用添加了不同剂量的单增李斯特死菌、活菌及金黄色葡萄球菌的15件饮料,15件熟肉制品进行模拟实样检测.结果 单增李斯特活菌EMA实时荧光PCR方法的Ct=(38.46-3.30)×log(菌量)(R2 =0.999).最低检测的活菌浓度为55 cfu/反应.对死菌DNA抑制效率≥99.98％.35株单增李斯特菌Ct值最低16.21,最高29.38,而25株非单单增李斯特菌、92株非单增李斯特菌的Ct值均大于35或无Ct值.重复试验Ct值变异系数小于5％.30件模拟实样单增李斯特菌的检测结果与常规方法完全一致.且EMA实时荧光PCR方法检出时间仅需10h左右,而常规分离培养方法需要5～7 d.结论 EMA实时荧光PCR检测技术是一种快速、简便、特异性强、灵敏度高、仅检测单增李斯特菌活菌的有效方法,可作为食品中检测单增李斯特活菌的方法推广使用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	占利		49	302	9.0	15.0
2	梅玲玲		83	735	14.0	25.0
3	徐昌平		44	355	10.0	16.0
4	张俊彦		37	506	11.0	22.0
5	张政		65	309	10.0	13.0
6	张云怡		14	36	4.0	4.0
7	陈鸿鹄		6	8	2.0	2.0
8	陈建才		9	18	3.0	4.0
9	杨勇		4	10	2.0	3.0