马疱疹病毒1型囊膜蛋白gD多克隆抗体制备及亚细胞定位

• 作者: 张艳楠 杨永龙 王世民
• 来源期刊: 病毒学报
• 学科: 农学
• 关键词: 马疱疹病毒1型(EHV-1) 囊膜蛋白gD 多克隆抗体 亚细胞定位
• 年，卷（期）: 2017,（3）
• 所属期刊栏目: 动物病毒研究论著
• 页码范围: 419-424
• 页数: 6页
• 分类号: S852.65
• 语种: 中文

摘要

本研究通过间接免疫荧光技术,确定了EHV-1囊膜蛋白gD单独表达于BHK-21细胞内的亚细胞定位情况,为其亚细胞定位机制及病毒二级囊膜的研究奠定了基础.以EHV-1基因组为模板,利用PCR方法扩增gD部分基因,并构建其原核表达载体pET28-gD,转入BL21(DE3)感受态细胞内进行诱导表达,利用Ni-NTA亲和层析法纯化gD重组蛋白;以纯化的重组蛋白为抗原免疫实验小鼠并制备抗囊膜蛋白gD的多克隆抗体;分别以间接ELISA方法及Western blot方法检测抗体效价及反应性;人工转染pVAX-Kozak-gD重组质粒至BHK-21细胞,利用IF技术对囊膜蛋白gD进行亚细胞定位.结果表明:成功表达了大小约29 kD的gD重组蛋白;制备的多克隆抗体效价为1∶102 400,能较好地与囊膜蛋白gD真核表达产物特异性结合;通过IF方法确定囊膜蛋白gD大部分呈斑点状分布于宿主细胞核周围的胞质中,极少量定位于细胞核内.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王世民		24	57	5.0	6.0
2	张艳楠		3	5	2.0	2.0
3	杨永龙		1	0	0.0	0.0