慢病毒载体法建立乳腺癌ST3Gal Ⅲ基因RNAi细胞模型

• 作者: 夏春辉 宋娟 崔红霞 沈业彤 王宏兰 王玉春 田华
• 来源期刊: 中国临床药理学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: ST3Gal Ⅲ基因 RNA干扰 转染 表达
• 年，卷（期）: 2017,（8）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 710-713
• 页数: 4页
• 分类号: R97
• 字数: 2627字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13699/j.cnki.1001-6821.2017.08.011

摘要

目的 研究用慢病毒载体法建立乳腺癌α2,3-唾液酸转移酶ST3 GalⅢ基因RNA干扰(RNAi)的细胞模型.方法 针对ST3 Gal Ⅲ基因设计4组短发夹RNA序列,合成DNA与线性化的pGLV3-H1-GFP载体连接,构建慢病毒载体质粒.鉴定后,进行病毒包装和病毒滴度检测;将获得的重组慢病毒pGLV3-H1-GFP-shST3转染人乳腺癌MDA-MB-231细胞后,将转染细胞分为3组:空白组,未转染组(mock cells,M);对照组(转染对照慢病毒,parent cells,P);干扰组,转染慢病毒载体pGLV5-H1-GFP-shST3(shST3-1,2,3,4).以荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达,经嘌呤霉素抗性筛选;用实时定量PCR 、Western blot检测转染后MDA-MB-231细胞中ST3Gal ⅢmRNA及蛋白表达,以流式细胞术分析细胞表面α2,3-唾液酸水平.结果 成功构建针对ST3Gal Ⅲ基因的RNAi慢病毒载体,病毒悬液滴度均＞2×108TU·mL-1.各转染细胞的转染效率达90％以上;经嘌呤霉素筛选后,干扰组的ST3 GalⅢmRNA的抑制率分别为42.1％,66.7％,30.1％,80.9％及蛋白表达水平分别下降了35.92％,75.64％,37.12％,81.75％.与对照组比较,干扰组细胞ST3 GalⅢ基因的mRNA及蛋白表达显著降低,差异有统计学意义(P ＜0.05);shST3-4组细胞表面α2,3-唾液酸水平明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 成功构建了乳腺癌ST3Gal Ⅲ基因RNAi的细胞模型shST3-4.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	夏春辉	齐齐哈尔医学院药学院	51	221	7.0	13.0
2	田华	齐齐哈尔医学院药学院	45	104	6.0	8.0
3	王宏兰	齐齐哈尔医学院药学院	24	61	5.0	7.0
4	崔红霞	齐齐哈尔医学院药学院	74	303	9.0	14.0
5	宋娟	齐齐哈尔医学院药学院	57	224	7.0	12.0
6	王玉春	齐齐哈尔医学院药学院	55	143	6.0	9.0
7	沈业彤		9	20	3.0	4.0