重组pEGFP-C1-CXCL1真核表达载体构建及其对内质网应激下人肝癌细胞HepG2的增殖作用

• 作者: 刘宁 叶甲舟 吴飞翔 李自慧 杨晓莉 毛瑞涛 王翠 白涛 邹岭 钟辉 陈伟 陈健康 陈洁 魏从文
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 医学
• 关键词: 趋化因子类 CXCL1 重组质粒 细胞增殖 癌,肝细胞
• 年，卷（期）: 2017,（10）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 792-795
• 页数: 4页
• 分类号: R735.7
• 字数: 3019字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7644/j.issn.1674-9960.2017.10.002

摘要

目的 构建pEGFP-C1-CXCL1真核表达载体,研究过表达CXCL1对内质网应激(ERS)下肝癌细胞增殖作用.方法 以HepG2细胞的cDNA文库为模板,通过PCR扩增CXCL1编码序列,并将其插入pEGFP-C1空载体,构建pEGFP-C1-CXCL1真核表达载体,随后将其瞬时转染到293 T细胞中,通过荧光显微镜和蛋白质免疫印迹法检测CXCL1在真核细胞中的表达情况,将pEGFP-C1-CXCL1转染至HepG2细胞中,CCK8检测CXCL1对TM诱导下的ERS肿瘤增殖的抑制作用.结果 菌液PCR和测序结果均证实得到pEGFP-C1-CXCL1真核表达载体,其转染293T细胞后,在荧光显微镜下可观察到绿色荧光,免疫印迹表明CXCL1在293T细胞中表达,CCK8实验表明,ERS条件下肿瘤的增殖受到抑制,而过表达的CXCL1可降低ERS下的HepG2细胞的增殖抑制.结论 成功构建了真核表达质粒pEGFP-C1-CXCL1,并在人胚肾293T细胞中瞬时表达成功,过表达的CXCL1可有效降低由ERS造成的肝癌细胞的增殖抑制.