利用Gateway技术构建神经元特异性人apoE4(1-272)真核表达质粒及鉴定

• 作者: 冯曾义 刘晓峰 卢颖洁 李子希 陈娟
• 来源期刊: 华中科技大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: apoE4(1-272) 神经元特异性表达 Gateway技术
• 年，卷（期）: 2017,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 369-373
• 页数: 5页
• 分类号: R542.2
• 字数: 3625字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-0741.2017.04.001

摘要

目的 构建神经元特异性人apoE4(1-272)片段的真核表达质粒,并转染小鼠神经母细胞瘤细胞(N2a细胞)验证其表达,为后续利用该质粒构建转基因小鼠,并探讨其作用奠定实验基础.方法 以同济医学院生物化学与分子生物学系实验室已有的人apoE4质粒为基础,利用Gateway技术设计引物,将人apoE4(1-272)片段克隆至pRP.EX3d载体上,并将神经元特异性启动子SYN1插入至人apoE4(1-272)片段之前,再借助IRES元件连接EGFP报告基因,构建pRP.EX3d-SYN1-apoE4(1-272)-IRES/EGFP重组表达质粒;经脂质体转染法将上述质粒转染至N2a细胞,转染24 h后,荧光显微镜观察转染效率,并采用Western blot检测apoE4(1-272)蛋白的表达水平.结果 成功构建神经元特异性表达人apoE4(1-272)的真核表达质粒,经测序鉴定各核心元件序列均正确无误,与预期结果相一致,且经转染N2a细胞观察到新构建质粒可顺利表达,Western blot检测结果显示apoE表达及分子量均与预期一致.结论 成功构建了神经元特异性人apoE4(1-272)片段的表达质粒,并初步鉴定了其表达功能,为后续开展相关研究奠定了实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘晓峰	华中科技大学同济医学院基础医学院生物化学与分子生物学系	3	10	2.0	3.0
3	李子希	华中科技大学同济医学院基础医学院生物化学与分子生物学系	1	0	0.0	0.0
7	卢颖洁	华中科技大学同济医学院附属中西医结合医院检验科	1	0	0.0	0.0
10	冯曾义	华中科技大学同济医学院附属中西医结合医院检验科	2	12	1.0	2.0