T7噬菌体展示人肝癌cDNA文库筛选人CD8+T淋巴细胞特异结合分子

• 作者: 张伟 张存 张英起 李维娜 薛晓畅 郝强 高凯丽
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 医学
• 关键词: 噬菌体展示技术 肝癌 CD8+T淋巴细胞 结合分子
• 年，卷（期）: 2017,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 333-337
• 页数: 5页
• 分类号: R392.1|Q78
• 字数: 3971字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2017.03.018

摘要

目的:利用噬菌体表面展示技术从人肝癌T7 cDNA文库中筛选出能与人CD8+T淋巴细胞特异结合的蛋白分子.方法:以人CD8+T淋巴细胞为筛选靶标,对人肝癌T7 cDNA噬菌体肽库进行4轮“吸附-洗脱-扩增”生物淘选与富集,ELISA鉴定特异结合的噬菌体单克隆;对获得的阳性克隆裂解液进行PCR扩增及DNA测序,然后进行生物信息学分析,确定所编码的结合蛋白.结果:经过4轮筛选,结合人CD8+T淋巴细胞的噬菌体克隆得到富集,通过测序与同源性比对分析获得17个特异性结合的多肽序列;生物信息学分析发现阳性噬菌体克隆的同源蛋白中,可能与肝癌免疫逃逸相关的分子有Unc-51样自噬活化激酶1(ULK1)、一般受体磷酸肌醇相关支架蛋白1(GRASP)、中间α球蛋白抑制因子H1(ITIH1)、富含亮氨酸重复8家族成员D(LRRC8D)和CD164等.结论:从人肝癌T7 cDNA噬菌体肽库中筛选获得了能与人CD8+T淋巴细胞特异结合的分子,为阐明人肝癌发生发展过程中肿瘤免疫逃逸相关机制奠定了基础.