恶性疟原虫组蛋白甲基转移酶SET7催化结构域的表达及活性鉴定

• 作者: 张亮亮 梁韶晖 江陆斌 蔡立娅 魏启美
• 来源期刊: 温州医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 恶性疟原虫 组蛋白甲基转移酶 重组蛋白表达 无细胞麦胚表达系统 活性鉴定
• 年，卷（期）: 2017,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 110-114
• 页数: 5页
• 分类号: R382.3
• 字数: 4401字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-9400.2017.02.006

摘要

目的:构建杆状病毒昆虫表达质粒pFast-N-set7cd、pFast-C-set7cd和无细胞麦胚表达载体pEU-His-set7cd,表达恶性疟原虫组蛋白甲基转移酶SET7催化结构域(PfSET7cd),并鉴定PfSET7cd的组蛋白甲基转移酶活性.方法:通过分子克隆技术构建获得pFast-N/C-set7cd以及pEU-His-set7cd表达质粒,尝试通过杆状病毒传代方式与无细胞麦胚表达方式获得重组PfSET7cd蛋白,以SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物,并进一步检测重组蛋白的酶活性.结果:用于昆虫表达的重组质粒pFast-N-set7cd、pFast-C-set7cd双酶切结果大小与测序结果均正确,但是Western blot并未检测到其在昆虫细胞中的可溶性表达产物;pEU-His-set7cd通过无细胞麦胚表达系统表达获得的蛋白与预测大小一致,经Western blot鉴定正确,并用NTA-Ni2+亲和层析纯化.体外酶活实验显示PfSET7cd具有催化H3第36位赖氨酸上三甲基化(H3K36me3)活性.结论:通过无细胞表达系统获得可溶性的PfSET7cd重组蛋白,PfSET7cd重组蛋白具有介导H3K36me3的活性,但不影响H3K4me3和H3K9me3水平.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张亮亮	温州医科大学基础医学院寄生虫学教研室	2	2	1.0	1.0
2	梁韶晖	温州医科大学基础医学院寄生虫学教研室	13	20	3.0	3.0
3	蔡立娅	温州医科大学基础医学院寄生虫学教研室	1	0	0.0	0.0
4	魏启美	温州医科大学基础医学院寄生虫学教研室	1	0	0.0	0.0
5	江陆斌	中科院上海巴斯德研究所分子病毒学和免疫学重点实验室	1	0	0.0	0.0