稳定表达人TLR5及NF-κB响应报告分子的HEK-293细胞系的建立

• 作者: 周国超 张瑞华 李丽琴 王陈 石童 陈学军 鹿晓晶
• 来源期刊: 国际药学研究杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 人Toll样受体-5 核因子-κB 稳定表达 慢病毒
• 年，卷（期）: 2017,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 420-426
• 页数: 7页
• 分类号: R329.26|R329.28
• 字数: 5520字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13220/j.cnki.jipr.2017.05.007

摘要

目的 构建人Toll样受体-5(hTLR5)和NF-κB信号通路响应的荧光素酶(luciferase)-绿色荧光蛋白(GFP)报告分子的慢病毒质粒,获得稳定表达hTLR5及NF-κB响应报告分子的HEK-293细胞系.方法 通过PCR及全基因合成方法获得hTLR5和5×NF-κB结合位点序列,分别构建pWSLV-hTLR5-puro和pWSLV-5×NF-κB-nanluc-GFP慢病毒质粒;将2个慢病毒质粒分别与包装质粒共转染HEK-293T细胞进行慢病毒包装,将获得的慢病毒上清经浓缩后共感染HEK-293细胞,经嘌呤霉素筛选和流式细胞分选后得到表达hTLR5及NF-κB响应报告分子的HEK-293细胞.经传代后,采用Western印迹法和免疫荧光法鉴定hTLR5表达情况,荧光显微镜下观察并采用荧光素酶定量法检测不同浓度细菌鞭毛蛋白(flagellin)对NF-κB信号通路的激活情况.结果 质粒酶切鉴定及DNA测序结果表明插入目的片段与预期相符,重组慢病毒质粒构建正确;HEK293-N-T细胞高表达hTRL5,且hTLR5能正确定位到细胞膜表面;鞭毛蛋白能显著激活HEK293-N-T细胞的NF-κB信号通路,且具有剂量依赖关系.结论 正确构建了hTLR5和NF-κB信号通路响应的荧光素酶-GFP报告分子的慢病毒质粒,并成功建立了稳定表达hTLR5及NF-κB响应报告分子的HEK-293细胞系.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李丽琴		10	75	4.0	8.0
2	张瑞华		8	47	2.0	6.0
3	鹿晓晶		2	4	1.0	2.0
4	石童		1	0	0.0	0.0
5	周国超		1	0	0.0	0.0
6	陈学军		1	0	0.0	0.0
7	王陈		1	0	0.0	0.0