猪PACAP基因真核表达载体的构建及其在3T3-L1前体脂肪细胞上的表达

• 作者: 徐宁迎 毛海光 沈一飞 高甜甜
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 垂体腺苷酸环化酶激活肽基因(PACAP) 真核表达 转染 3T3-L1前体脂肪细胞
• 年，卷（期）: 2017,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文与报告
• 页码范围: 415-424
• 页数: 10页
• 分类号: S828
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2017.03.008

摘要

垂体腺苷酸环化酶激活肽(pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide,PACAP)是由下丘脑合成并分泌,存在于人(Homo sapiens)和动物体内的生物活性物质,能够刺激垂体生长激素(growthhormone,GH)的合成与分泌,从而促进动物体的生长发育.本研究首先克隆了猪(Sus scrofa) PACAP基因(pPACAP)的全长cDNA,利用油红O染色技术和qRT-PCR技术研究PACAP基因在3T3-L1前体脂肪细胞成脂分化过程中的表达规律;继而构建了真核表达载体pEGFP-pPA CAP,将其转染至小鼠(Mus musculus)3T3-L1前体脂肪细胞,48 h内采用CCK-8法检测细胞生长情况并于48 h后检测3T3-L1前体脂肪细胞中的pPACAP、脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FAS)和乙酰辅酶A羧化酶(acetyl-CoA carboxylase,ACC)mRNA的表达及pacap-EGFP融合蛋白的表达.成脂分化结果表明,PACAP mRNA随着脂肪细胞的成熟,其表达量逐渐上升,在第4天时,表达量最高;双酶切及测序结果表明,成功构建了pPACAP基因的真核表达载体pEGFP-pPA CAP;真核表达载体转入培养的3T3-L1前体脂肪细胞中后,在荧光显微镜下,重组质粒组和空载体组均发出绿色荧光,48 h时转染效率最高,且PACAP、FAS和ACC mRNA相对表达量均有极显著的提高(P＜0.01),成功检测到pacap融合蛋白.本研究结果表明,PACAP参与到脂肪形成的机制中.该结果为体外研究猪PACAP基因对脂肪合成代谢及其机体代谢的调节机制提供了理论依据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐宁迎	浙江大学动物科学学院	147	1170	18.0	27.0
2	毛海光	浙江大学动物科学学院	8	4	1.0	1.0
3	沈一飞	浙江大学动物科学学院	7	22	2.0	4.0
4	高甜甜	浙江大学动物科学学院	2	3	1.0	1.0