尘螨变应原Derf 6/pET32a（+）重组质粒构建、表达、纯化及其产物血清IgE结合率

• 作者: 俞黎黎 周鹰 崔玉宝 张承伯 杨李 韩玉清
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 尘螨 变应原 基因表达 蛋白质纯化
• 年，卷（期）: 2017,（1）
• 所属期刊栏目: 免疫学技术与方法
• 页码范围: 76-80
• 页数: 5页
• 分类号: R384.4
• 字数: 3757字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2017.01.015

摘要

目的：：获得尘螨变应原第6组分Der f 6原核表达产物并检测其与尘螨过敏性哮喘患儿血清抗体IgE结合率。方法：酶切质粒pET28a(+)-Der f 6获得目的基因Der f 6,将其与pET32a(+)载体连接成质粒pET32a (+)-Der f 6,转化BL21细菌后,用异丙基硫代半乳糖苷( IPTG)诱导表达,用Ni+离子亲和层析柱纯化表达产物,用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳( SDS-PAGE)、免疫印迹实验( Western blot)和蛋白质串联质谱( MALDI-TOF/TOF)鉴定纯化产物。以纯化获得的产物为包被抗原建立间接ELISA法检测尘螨过敏性哮喘患儿血清抗体反应情况。结果：成功构建了原核表达质粒pET32a (+)-Der f 6,将该质粒转化E. coli BL21诱导表达,亲和层析纯化后,SDS-PAGE显示获得目的蛋白,Western blot验证其能够与载体的组氨酸标签结合,质谱鉴定其Der f 6结构一致。以此产物为包被抗原建立间接ELISA检测尘螨过敏性哮喘患儿血清,阳性率为41.3%(19/46)。结论：成功构建了原核表达质粒pET32a (+)-Der f 6,亲和纯化获得的目的蛋白具有良好的反应原性。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	韩玉清	东南大学医学院附属盐城医院检验科	10	37	3.0	5.0
2	俞黎黎	东南大学医学院附属盐城医院检验科	1	3	1.0	1.0
6	周鹰	东南大学医学院附属盐城医院检验科	2	4	1.0	2.0
7	杨李	东南大学医学院附属盐城医院检验科	1	3	1.0	1.0
11	张承伯	东南大学医学院附属盐城医院检验科	1	3	1.0	1.0