大鼠 Ad-pDOV-mCMV-TRPC4-EGFP-3 FLAG 质粒的构建、基因结构分析及鉴定

• 作者: 况春燕 杨藩
• 来源期刊: 贵州医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 质粒,Ad -pDOV-mCMV-MCS-EGFP-3FLAG 瞬时受体电位通道4 大鼠 腺病毒 基因结构
• 年，卷（期）: 2017,（2）
• 所属期刊栏目: 专题研究1
• 页码范围: 130-135
• 页数: 6页
• 分类号: R392
• 字数: 4043字
• 语种: 中文
• DOI: 10.19367/j.cnki.1000-2707.2017.02.002

摘要

目的：大鼠Ad-pDOV-mCMV-TRPC4-EGFP-3FLAG基因重组表达质粒的构建及其基因结构分析。方法：通过UCSC（ http：//genome. ucsc. Edu/）分析大鼠瞬时受体电位通道4（ TRPC4）及其家族基因组结构，并通过NCBI确定了TRPC4的蛋白结构域，通过BioGPS（ http：//biogps. org/#goto=welcome）分析其表达模式；PCR扩增大鼠TRPC4蛋白编码区域（ CDS），并通过限制性内切酶与穿梭载体pDOV-mCMV-MCS-EGFP-3FLAG进行连接，其产物转化细菌感受态细胞；挑取阳性克隆进行菌落PCR鉴定，并对阳性克隆进行测序验证，测序正确的克隆即为目的质粒，命名为pDOV-mCMV-TRPC4-EGFP-3FLAG；将该质粒转染HEK293细胞进行腺病毒包装，并命名为Ad-pDOV-mCMV-TRPC4-EGFP-3FLAG，通过 Western blot验证蛋白的表达。结果：生物学分析发现TR-PC4蛋白保守的TRP-2、ANK及TRP结构域，通过BioGPS分析发现TRPC4在杏仁核和海马中表达明显，在血管内皮细胞中也有表达；PCR克隆获得3000 bp 的 TRPC4 CDS 序列，CDS 被亚克隆到表达载体 pDOV-mCMV-MCS-EGFP-3FLAG中，酶切鉴定及测序验证正确；进行腺病毒包装后的病毒可以在HEK293细胞中表达TRPC4-EGFP-3FLAG 融合蛋白，Western blot证实其为含flag标签的蛋白且大小为128 KDa。结论：成功构建了大鼠TRPC4的腺病毒表达载体Ad-pDOV-mCMV-TRPC4-EGFP-3FLAG。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	况春燕	贵州省人民医院心内科	10	22	3.0	4.0