人肝细胞生长因子受体原核载体的构建表达及纯化

• 作者: 张欣悦 张飞翔 李建雄 李长燕 董小明 詹轶群 赵珂 邱栾 高瑞
• 来源期刊: 解放军医学院学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 肝细胞生长因子受体 原核表达 纯化
• 年，卷（期）: 2017,（7）
• 所属期刊栏目: 基础研究论著
• 页码范围: 657-661
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 字数: 3899字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-5227.2017.07.016

摘要

目的 克隆人肝细胞生长因子受体(MET)基因,构建不同结构域(1-507、1-587、553-970、553-1057、1018-1390)的原核表达载体,获得其原核表达产物,并纯化相应蛋白质,为基于MET不同结构域的小分子抑制剂筛选提供依据.方法 采用PCR技术从人肝细胞癌细胞系Hep G2 cDNA文库中扩增出人MET基因(1-507、1-587、553-970、553-1057、1018-1390),将其克隆到pGEX-4T-2载体中,在大肠埃希菌BL21中表达后,对原核表达产物进行纯化,以SDS-PAGE和Western blot鉴定表达与纯化产物.结果 从人肝细胞癌细胞系Hep G2 cDNA文库中扩增获得分别约1 524 bp、1 764 bp、1 257 bp、1 518 bp和1 119 bp的DNA片段,并成功构建在pGEX-4T-2载体上,经测序与目的序列完全一致;在BL21中诱导表达出相对分子质量约为82 kU、91 kU、72 kU、82 kU、67 kU的目的蛋白,经纯化后获得了纯度较高的重组蛋白GST-c-MET.结论 成功获得了MET不同结构域的重组蛋白GST-c-MET(1-507、1-587、553-970、553-1057、1018-1390),为后续研究MET小分子抑制剂筛选奠定了实验基础.