应用Gibson Assembly方法构建狂犬病病毒SRV9株重组感染性cDNA克隆

• 作者: 毛丽萍 王伟 皮文辉 简子健 翟少华 魏玉圆
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 狂犬病病毒 GibsonAssembly连接法 构建 感染性cDNA克隆
• 年，卷（期）: 2017,（11）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 11-17
• 页数: 7页
• 分类号: S852.659.1
• 字数: 4820字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-5038.2017.11.003

摘要

应用Gibson Assembly连接法精确快速构建狂犬病病毒SRV9株重组感染性cDNA克隆,为狂犬病病毒感染性cDNA克隆的构建提供新的方法.应用Gibson Assembly连接法在同一反应体系内,将多个片段和经限制性内切酶线性化的载体,按设计的顺序进行连接,实现多个片段的一步组装.设计带有20 bp~30 bp重叠序列的PCR引物,扩增得到带有重叠序列的狂犬病病毒5个结构蛋白基因和增强型荧光蛋白基因.扩增的片段和线性化的载体经胶回收纯化后,与Gibson连接液混合后,50℃反应60 min,连接产物转化Stbl3感受态细胞,提取重组质粒,经PCR、酶切和测序鉴定,缺失了病毒伪基因Ψ区和糖蛋白基因的跨膜区并且将增强型荧光蛋白基因插入糖蛋白基因终止密码子前,构建了全长17600 bp的重组质粒,完成了重组全长感染性cDNA克隆的构建.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	简子健	新疆农业大学动物医学学院	77	476	10.0	18.0
2	王伟	新疆农业大学动物医学学院	61	329	10.0	15.0
3	翟少华	新疆农业大学动物医学学院	50	71	4.0	5.0
4	毛丽萍	新疆农业大学动物医学学院	9	10	2.0	2.0
5	魏玉圆	新疆农业大学动物医学学院	3	4	1.0	1.0