单核细胞增生李斯特菌hlyA基因实时荧光PCR的建立与研究

• 作者: 林艳艳 谭翰清 邢子伟
• 来源期刊: 中国热带医学
• 学科: 医学
• 关键词: 单核细胞增生性李斯特菌 实时荧光PCR 溶血素基因
• 年，卷（期）: 2017,（12）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1184-1188
• 页数: 5页
• 分类号: R378
• 语种: 中文
• DOI: 10.13604/j.cnki.46-1064/r.2017.12.05

摘要

目的 建立单核细胞增生李斯特菌hlyA基因TaqMan探针实时荧光PCR,用于食品卫生检验的快速筛查.方法 根据单核细胞增生李斯特菌hlyA基因设计特异的引物与TaqMan探针,建立和优化实时荧光PCR反应体系,评估其特异性、灵敏度、稳定性,并在食品卫生检验中与细菌分离方法同步应用比较.结果 建立了单核细胞增生李斯特菌TaqMan探针实时荧光PCR反应体系,经优化其最佳退火/延伸的温度为58℃,25 μL反应体系中上、下游引物和探针最佳终浓度配比分别为0.7、0.7、0.4 μmol/L;该实时荧光PCR反应体系可在35 min内完成检测,与沙门菌、绵羊李斯特菌、英诺克李斯特菌等16种非目标菌无交叉反应,对阳性克隆质粒的检测下限可达100拷贝/μL的稀释梯度,对同一核酸浓度样本20次检测的Ct值变异系数为0.46％;在对120份食品安全风险监测标本的快速检测应用中,6份标本单核细胞增生李斯特菌实时荧光PCR扩增阳性,从相应样本中分离出6株单核细胞增生李斯特菌,实时荧光PCR与分离培养方法检测结果相一致.结论 针对单核细胞增生李斯特菌hlyA基因建立的TaqMan探针实时荧光PCR具有快速、特异、灵敏、稳定等优势,可用于食品卫生检验中单核细胞增生李斯特菌的快速、高效筛查.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	谭翰清		14	28	3.0	4.0
2	林艳艳		1	1	1.0	1.0
3	邢子伟		1	1	1.0	1.0