大鼠NeuroD2基因的克隆、真核表达载体的构建及其在小鼠MSCs细胞中的表达

• 作者: 姬菩忠 宋学文 张勇 秦文 赵兴绪 赵红斌
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: NeuroD2 基因克隆 生物信息学分析 pIRES2-AcGFP1-ND2
• 年，卷（期）: 2017,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 134-141
• 页数: 8页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2016-1087

摘要

克隆大鼠NeuroD2基因,旨在构建pIRES2-AcGFP1-ND2真核表达载体并检测其在小鼠MSCs中的表达.采用RT-PCR技术克隆大鼠NeuroD2基因,分析该蛋白质结构、功能域、细胞定位及与其他物种同源性;构建pIRES2-AcGFP1-ND2表达载体并转染小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs);采用Real-time PCR、免疫荧光及Western blot技术检测重组质粒在小鼠MSCs中的表达.结果表明,大鼠NeuroD2基因CDS区全长1149 bp,共编码382个氨基酸,属于bHLH家族,二级结构以 α-螺旋和无规卷曲为主,空间结构呈现近似"螺旋-环-螺旋(HLH)"结构,主要分布在细胞核,氨基酸序列与家鼠(99%)、罗猴(98%)、人(97.7%)同源性较高;Real-time PCR结果表明转染组NeuroD2基因表达量显著高于对照组(P<0.05);免疫荧光及Western blot结果显示转染组NeuroD2蛋白表达量显著高于对照组(P<0.05).成功克隆大鼠NeuroD2基因并构建了pIRES2-AcGFP1-ND2真核表达载体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵兴绪	甘肃农业大学生命科学技术学院	178	766	13.0	19.0
2	张勇	甘肃农业大学生命科学技术学院	147	410	9.0	11.0
3	赵红斌	甘肃农业大学生命科学技术学院	77	325	10.0	13.0
5	姬菩忠	甘肃农业大学生命科学技术学院	7	7	2.0	2.0
7	宋学文	兰州军区兰州总医院骨科研究所	2	0	0.0	0.0
10	秦文	兰州军区兰州总医院骨科研究所	5	10	3.0	3.0