重组人载脂蛋白A-Ⅱ在毕赤酵母中的分泌表达及鉴定

• 作者: 宋飞玉 张英 苏曼曼 许天敏 陈岐辉
• 来源期刊: 中国医药
• 学科: 医学
• 关键词: 载脂蛋白A-Ⅱ 分泌表达 毕赤酵母
• 年，卷（期）: 2017,（7）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1094-1097
• 页数: 4页
• 分类号: R34
• 字数: 4121字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1673-4777.2017.07.037

摘要

目的 在毕赤酵母中高效分泌表达与天然人载脂蛋白A-Ⅱ具有相同结构和活性的重组人载脂蛋白A-Ⅱ(rhApoA-Ⅱ).方法 通过逆转录聚合酶链反应(PCR)法从人肝组织钓取编码人ApoA-Ⅱ的cDNA,将其与pPICZα载体连接,构建真核分泌型重组质粒.重组质粒人ApoA-Ⅱ-pPICZ0经过Sac Ⅰ酶切线性化,然后转化毕赤酵母感受态细胞.经过酵母基因组鉴定,筛选重组工程菌,建立rhApoA-Ⅱ的毕赤酵母分泌表达体系,对rhApoA-Ⅱ进行十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹实验(Western blot)分析.结果 经PCR法克隆的人ApoA-ⅡcDNA序列与GenBank登录序列一致.还原电泳条件下,SDS-PAGE和Western blot分析均在分子量约8 700处出现特异性条带.结论 成功构建了人ApoA-Ⅱ-pPICZα表达载体,在毕赤酵母菌中高效分泌表达rhApoA-Ⅱ,为进一步研究其结构与功能提供了物质基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	许天敏	吉林大学第二医院妇产科	89	363	11.0	16.0
2	陈岐辉	吉林大学第一医院泌尿外科	52	247	8.0	11.0
3	张英	吉林省人民医院内分泌科	28	118	6.0	9.0
4	苏曼曼	吉林大学药学院	13	54	3.0	7.0
5	宋飞玉	吉林康乃尔药业有限公司质量部	3	1	1.0	1.0