PRRSV细胞受体CD163 SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR方法的建立

• 作者: 丁耀忠 张杰 张永光 王俊 马小元
• 来源期刊: 黑龙江畜牧兽医（下半月）
• 学科: 农学
• 关键词: 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) CD163 SYBR Green Ⅰ 荧光定量RT-PCR Marc-145细胞
• 年，卷（期）: 2017,（7）
• 所属期刊栏目: 兽医科技
• 页码范围: 108-110,295-296
• 页数: 1页
• 分类号: S854.4+3|S855.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.13881/j.cnki.hlixmsy.20170510.001

摘要

为了探索猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)细胞受体CD163在宿主感染PRRSV过程中的表达情况,根据CD163的序列在其保守区设计了1对特异性引物,基于SYBR Green Ⅰ荧光染料建立了一步法检测CD163的实时荧光定量RT-PCR(real time RT-PCR)法,并对该方法进行了特异性、敏感性、重复性试验及样品检测试验.结果表明:建立的方法具有较高的特异性,PRRSV的其他几个受体(CD151、HS)均为阴性反应;对CD163的检测下线为10个拷贝数的模板RNA,比常规RT-PCR方法的灵敏度高10倍;对样品进行3次组内和组间重复试验,变异系数(CV)＜2％,具有较好的重复性和稳定性;利用该方法对PRRSV感染Marc-145细胞后不同时间段CD163的转录水平进行检测,结果显示CD163在48小时时的mRNA含量明显高于其他各时间段.说明所建立的针对CD163的检测方法完全可以应用于临床样品的检测.