人源SIRT4蛋白在毕赤酵母中的表达及纯化

• 作者: 何彬 刘亭 朱红 李燕 王春 王芳 邹叶芳 陈晓雪
• 来源期刊: 郑州大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 人源SIRT4蛋白 巴斯德毕赤酵母 胞内表达
• 年，卷（期）: 2018,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 443-447
• 页数: 5页
• 分类号: R915
• 字数: 3445字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13705/j.issn.1671-6825.2017.11.130

摘要

目的:获得表达量较高且有活性的人源SIRT4蛋白.方法:将SIRT4基因克隆到pPICZA载体上,得到重组pPICZA-SIRT4表达质粒.重组质粒线性化后转入到巴斯德毕赤酵母X33感受态细胞中,筛选出阳性菌株.将阳性重组菌株发酵培养,并对诱导剂甲醇浓度进行优化,表达蛋白用镍柱HisTrapTM HP进行纯化,并对表达的蛋白进行活性考察.结果:SDS-PAGE显示表达的SIRT4目的蛋白大小约33000,与预期蛋白相对分子质量大小相符,进一步利用His标签抗体通过Western blot确认了目标蛋白,并且初步验证了SIRT4的去生物素酰化和去硫辛酰化的活性.结论:成功用巴斯德毕赤酵母表达了有活性的SIRT4蛋白,并且获得酵母表达的最佳诱导条件.