慢病毒介导稳定表达FABP4的小尾寒羊成纤维细胞系的构建

• 作者: 于翔 徐照学 朱肖亭 楚秋霞 滑留帅 王二耀 王璟 白杰 赵洪昌 辛晓玲 陈付英
• 来源期刊: 华北农学报
• 学科: 农学
• 关键词: FABP4基因 慢病毒 小尾寒羊 原代成纤维细胞
• 年，卷（期）: 2018,（1）
• 页码范围: 121-126
• 页数: 6页
• 分类号: S826|Q78
• 字数: 5770字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7668/hbnxb.2018.01.019

摘要

构建1株能够稳定表达FABP4的小尾寒羊成纤维细胞系,用于小尾寒羊未来的品种保护、开发与利用,首先利用组织块培养法制备了小尾寒羊原代成纤维细胞,然后利用全基因合成法克隆了绵羊 FABP4基因,并构建了过表达FABP4的慢病毒载体.经过包装后,使用获得的慢病毒感染小尾寒羊原代成纤维细胞,并通过嘌呤霉素筛选稳定转染细胞,最后应用Western Blot鉴定FABP4蛋白的过表达水平.结果表明,经过传代2 ~3次后,得到纯度较高的小尾寒羊原代成纤维细胞.滴度测定表明,当在96孔板中添加病毒原液量为10 -4μL时,观测不到荧光.当添加量为10 -3μL,能够观测到荧光,说明获得慢病毒的滴度为1 ×106TU/mL以上.利用制备的慢病毒感染小尾寒羊原代成纤维细胞,并经过嘌呤霉素筛选后,在荧光显微镜下所有细胞均能观察到绿色荧光.应用Western Blot分析发现,在对照组几乎检测不到 FABP4蛋白的表达,而在病毒感染组则能够清晰的观察到FABP4蛋白的表达,说明成功制备了稳定表达FABP4的小尾寒羊成纤维细胞系.