USTB-05-B基因在大肠杆菌中的表达与纯化研究

• 作者: 刘祖文 张旭东 王华生 闫海
• 来源期刊: 环境科学与技术
• 学科: 地球科学
• 关键词: 微囊藻毒素 分子克隆 亲和层析 纯化
• 年，卷（期）: 2018,（1）
• 页码范围: 1-5
• 页数: 5页
• 分类号: X172
• 语种: 中文
• DOI: 10.19672/j.cnki.1003-6504.2018.01.001

摘要

采用生物学技术对高效降解线性微囊藻毒素-LR (microcystin-LR,MC-LR)的USTB-05-B酶进行克隆表达及纯化研究.首先利用分子克隆技术得到重组菌pET30a(+)/USTB-05-B/BL21 (DE3).在诱导剂IPTG浓度为0.25 mmol/L、温度30℃和诱导时间4h条件下,重组菌能大量表达目的蛋白.然后利用亲和层析柱对重组菌破碎后的无细胞提取液(cell free extracts,CE)进行纯化,当咪唑浓度为100 mmol/L时,洗脱下来的蛋白纯度高.最终得到USTB-05-B蛋白纯度为91.1‰,浓度为0.205 mg/mL.纯化后的USTB-05-B酶具有较高的活性,能在1h内将10.8 mg/L的线性MC-LR降解完全.纯化后的目的蛋白为研究USTB-05降解MCs分子机理奠定基础,为有效提高降解MCs速率提供新材料.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘祖文		64	375	10.0	16.0
2	王华生		19	87	6.0	8.0
3	张旭东		3	8	2.0	2.0
4	闫海		1	0	0.0	0.0