人源天然抗TNF-αScFv抗体的筛选及性质分析

• 作者: 乔玉玲 卢卫嘉 张超 毛晓燕 熊颖 王建锋 秦海艳 陈继军
• 来源期刊: 微生物学免疫学进展
• 学科: 医学
• 关键词: 噬菌体抗体库 人肿瘤坏死因子α 筛选 中和活性 亲和力
• 年，卷（期）: 2018,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 20-26
• 页数: 7页
• 分类号: R392
• 字数: 5138字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13309/j.cnki.pmi.2018.02.005

摘要

目的 以人肿瘤坏死因子(human tumour necrosis factor-α,human TNF-α)为靶抗原,从构建好的人源天然单链抗体(single-chain antibody fragment,ScFv)噬菌体抗体库中筛选对应的ScFv抗体,验证其中和活性后测定动力学常数(kineticdissociation,KD).方法 以TNF-α梯度稀释后包被免疫管,对人源天然ScFv噬菌体抗体库进行3轮吸附-洗脱-扩增的富集筛选,制备TNF-α单克隆噬菌体抗体颗粒,经ELISA试验筛选阳性克隆后测序并分析;将正确的阳性抗体序列亚克隆到pET-26b表达载体上,原核表达后用Ni Sepharose 6 Fast Flow介质进行纯化;用MTT比色法对筛选的ScFv进行中和活性验证,并测定其中和抗体的KD.结果 通过3轮筛选共得到18个正确的抗体氨基酸序列,对其原核表达及纯化后得到的6株可溶性表达的抗TNF-α ScFv进行中和活性验证,并对其中有中和活性的4株ScFv抗体测定KD.结论 从人源天然ScFv噬菌体抗体库中成功地筛选出4株抗人TNF-α的ScFv中和抗体,其中1株ScFv抗体的KD为4.80×10-8,细胞毒中和率达到48.9％,达到了药用级抗人TNF-α中和抗体的研发要求,为全分子抗体药物的构建及稳定细胞株的筛选奠定了一定的基础.