14-3-3η蛋白的生物信息学分析及原核表达

• 作者: 安冬洁 曹秀丽 秦鸿雁 赵俊龙 高春辰 魏调霞
• 来源期刊: 中华老年多器官疾病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 计算生物学 巨噬细胞 原核表达 蛋白纯化 14-3-3η
• 年，卷（期）: 2018,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 216-221
• 页数: 6页
• 分类号: R392.12
• 字数: 4286字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11915/j.issn.1671-5403.2018.03.047

摘要

目的 分析巨噬细胞不同极化状态下14-3-3ηmRNA表达及其生物信息,并构建14-3-3η蛋白原核表达载体,为研究其在巨噬细胞活化中的作用提供实验基础.方法 提取C57BL/6小鼠骨髓原代巨噬细胞mRNA,反转录后用实时定量聚合酶链式反应(PCR)检测14-3-3ηmRNA水平的改变.运用ProtParam tool、SOPMA等在线软件对14-3-3η氨基酸序列进行分析.以小鼠巨噬细胞cDNA为模板,采用PCR的方法扩增14-3-3η基因,插入pGEX-4T-3载体中,双酶切和测序鉴定正确的重组质粒转化入大肠杆菌BL21菌株,用异丙基硫代半乳糖苷诱导其原核表达并纯化,SDS-PAGE法和Western blotting法对融合蛋白进行鉴定.采用Graphpad prism 5软件进行统计分析.样本比较均采用配对t检验.结果 M1型巨噬细胞14-3-3η表达降低,M2型趋势相反.生物信息学表明14-3-3η蛋白其二级结构中主要为α-螺旋(占62.60%)且疏水性较差(疏水系数为-0.607).酶切和测序结果提示重组质粒pGEX-4T-3-14-3-3η构建成功.SDS-PAGE和Western blotting结果表明融合蛋白谷胱甘肽-S-转移酶(GST)-14-3-3η成功表达和纯化.结论 本实验对14-3-3η进行了初步的生物信息学分析,成功表达并纯化融合蛋白GST-14-3-3η,为14-3-3η在巨噬细胞极化上的功能研究奠定了实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	安冬洁	空军军医大学基础医学部遗传学与发育生物学教研室	2	1	1.0	1.0
2	高春辰	空军军医大学基础医学部遗传学与发育生物学教研室	2	1	1.0	1.0
3	秦鸿雁	空军军医大学基础医学部遗传学与发育生物学教研室	6	3	1.0	1.0
4	赵俊龙	空军军医大学基础医学部遗传学与发育生物学教研室	3	1	1.0	1.0
5	曹秀丽	空军军医大学基础医学部遗传学与发育生物学教研室	2	1	1.0	1.0
6	魏调霞	空军军医大学基础医学部遗传学与发育生物学教研室	1	1	1.0	1.0