基于CRISPR/Cas9系统的HEK293T细胞DMD基因第51号外显子的靶向敲除

• 作者: 关方霞 孔祥东 屈素真 崔思颖 李双 蔡奥捷 马珊珊
• 来源期刊: 基础医学与临床
• 学科: 医学
• 关键词: CRISPR/Cas9 DMD基因 单载体质粒 HEK293T细胞 外显子敲除
• 年，卷（期）: 2018,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 375-380
• 页数: 6页
• 分类号: R394.3
• 字数: 2642字
• 语种: 中文

摘要

目的 应用CRISPR/Cas9基因编辑技术,完成HEK293T细胞中DMD基因第51号外显子(exon51)高效的靶向敲除.方法 设计靶向人DMD基因exon515′端及3′端的sgRNA并克隆至CRISPR/Cas9载体质粒PX459中,转染至HEK293T细胞后,提取基因组DNA并使用Surveyor法检测切割活性;使用目标外显子两端切割活性最高的sgRNA构建PX459-2sgRNA质粒,转染至HEK293T细胞后用PCR及T载体测序检测靶向外显子切除情况.结果 50%的HEK293T细胞中DMD基因 exon51被定向切除,编辑效率较高.结论 建立使用CRISPR/Cas9单质粒敲除人DMD基因 exon51的平台,为DMD及其他遗传病的基因治疗研究奠定实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孔祥东	郑州大学第一附属医院遗传与产前诊断中心	163	325	8.0	11.0
2	关方霞	郑州大学生命科学学院	64	248	9.0	12.0
3	马珊珊	郑州大学生命科学学院	39	137	6.0	9.0
4	李双	郑州大学第一附属医院遗传与产前诊断中心	5	16	2.0	4.0
5	蔡奥捷	郑州大学第一附属医院遗传与产前诊断中心	13	32	3.0	4.0
6	屈素真	郑州大学第一附属医院遗传与产前诊断中心	5	11	2.0	3.0
7	崔思颖	郑州大学第一附属医院遗传与产前诊断中心	7	15	3.0	3.0