酶连接介导PCR法构建酵母PMT3基因缺失菌株

• 作者: 刘新光 周涛 宋浩昌 崔红晶 赵炜
• 来源期刊: 牡丹江医学院学报
• 学科: 生物学
• 关键词: PCR 酵母细胞 载体 分段克隆
• 年，卷（期）: 2018,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1-3,23
• 页数: 4页
• 分类号: Q291
• 字数: 1508字
• 语种: 中文

摘要

目的 本文运用酶连接介导的PCR法构建酿酒酵母PMT3基因缺失菌株.方法 以酿酒酵母基因组DNA为模板,PCR扩增PMT3基因开放阅读框两侧片段,双酶切后,定向克隆于pRS305载体;限制性内切酶MluⅠ线性化基因缺失重组载体(pRS305-pmt3-ko),采用醋酸锂的方法将重组载体转化酵母细胞;经营养缺陷型培养基筛选,PCR法验证阳性克隆酵母菌株.结果 基因缺失重组载体测序正确,PMT3基因缺失酵母菌株构建成功.结论 利用基因缺失重组载体pRS305-pmt3-ko,成功构建PMT3基因缺失酵母菌株.