AAV-SaCas9敲除MSTN基因病毒的构建及鉴定

• 作者: 杨国宇 樊爽爽 汪新建 王江 翁少亭 褚贝贝
• 来源期刊: 河南农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 肌肉生长抑制素基因 CRISPR-Cas9 腺相关病毒载体 293T细胞
• 年，卷（期）: 2018,（1）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医
• 页码范围: 118-121
• 页数: 4页
• 分类号: S852.23
• 字数: 3172字
• 语种: 中文
• DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2018.01.021

摘要

为了研究肌肉生长抑制素(MSTN)的相关功能,应用分子生物学方法构建敲除MSTN的AAV-SaCas9载体,通过转染293T细胞提取基因组后进行T7酶切鉴定、TA克隆及测序确定该基因的敲除效果;将鉴定正确的AAV-SaCas9重组质粒与pHelper质粒共转染AAV.-293细胞3d后,分离纯化病毒并用实时荧光定量PCR法检测病毒滴度.结果显示,成功构建了敲除MSTN基因的AAV-SaCas9重组载体,T7酶切和测序鉴定出sgRNA2位点可以对MSTN进行编辑,并成功将其包装成病毒,经荧光定量PCR鉴定病毒滴度为2.73×1012vg/mL.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王江	河南农业大学/农业部动物生化与营养重点开放实验室	12	13	2.0	3.0