猪源干扰素刺激基因PPBP荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用

• 作者: JUNG Yong-Sam 刘珂 李蓓蓓 王飞飞 石元元 邱亚峰 邵东华 郇贝丽 钱莺娟 马志永 魏建超
• 来源期刊: 中国动物传染病学报
• 学科: 农学
• 关键词: 促血小板碱性蛋白 SYBR GreenI 实时荧光定量PCR
• 年，卷（期）: 2018,（3）
• 所属期刊栏目: 病毒
• 页码范围: 28-33
• 页数: 6页
• 分类号: S852.42
• 字数: 3074字
• 语种: 中文

摘要

根据猪源干扰素刺激基因PPBP(pro-platelet basic protein)基因全长序列,使用引物设计软件Primer Premier5.0设计合成特异性引物,经过PCR扩增,将基因扩增的片段连接到相应的载体上,成功构建重组质粒p3XFLAG-CMV-7.1-PPBP.重组质粒经过筛选、鉴定以及纯化后,经10倍系列稀释作为质控样品,用于实时荧光定量PCR中PPBP标准曲线的构建,并检测重复性、灵敏性和特异性.结果显示标准曲线线性关系R2＞0.99;特异性试验中也能检测到PPBP扩增曲线;组间和组内变异系数均小于5%.使用建立的SYBR Green I荧光定量RT-PCR检测PRRSV感染组织和未感染组织中PPBP的表达情况,能够检测出组织中PPBP的含量存在差异.本研究初步建立了检测猪PPBP基因的SYBR Green I荧光定量RT-PCR的方法,为后续猪传染性疾病和猪PPBP之间相互关系的研究提供一个特异灵敏的检测和手段.