杂交兰实时荧光定量PCR内参基因的筛选

• 作者: 吴建设 林榕燕 樊荣辉 钟淮钦 黄敏玲
• 来源期刊: 中国细胞生物学学报
• 关键词: 杂交兰 实时荧光定量PCR 内参基因 表达稳定性
• 年，卷（期）: 2018,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 381-389
• 页数: 9页
• 语种: 中文
• DOI: 10.11844/cjcb.2018.03.0285

摘要

为了给杂交兰的基因功能表达和调控研究提供内参基因,本研究采取同源克隆方法和RT-PCR技术,以杂交兰‘黄金小神童’叶片为材料,分离杂交兰Ch18S rRNA、Ch28S rRNA、ChACT、Ch TUA、ChTUB、ChUBQ、ChEF-1α和ChrpoB基因的片段,以10个不同品种杂交兰叶片及‘黄金小神童’花器官不同部位为材料,利用实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,qPCR)检测分析各引物的扩增效率和相对表达量,采用geNorm、NormFinder和BestKeeper软件对各个候选内参基因的表达稳定性进行分析,并通过研究杂交兰花器官不同部位ChPDS基因的表达模式来验证筛选得到的内参基因的可靠性.结果显示,各引物扩增的片段长度分别为171 bp、148 bp、183 bp、146 bp、130 bp、147bp、203 bp、139 bp,扩增效率分别为1.94、2.19、1.88、1.99、2.12、2.20、2.11、1.98.综合3个软件的评价结果发现,杂交兰不同品种叶片中最佳内参基因为ChACT,不同花器官部位中最稳定内参基因为ChACT、Ch TUB、ChUBQ和ChEF-1 α;而对于实验中所有样品来说,内参基因稳定性最高的为ChTUB;说明不同的实验条件下,所需的内参基因不同.ChPDS法因相对表达水平分析结果证实了所筛选内参基因的可靠性,以ChUBQ、ChEF-1α、Ch TUB、ChACT及Ch UBQ和ChEF-1α基因组合进行校正的ChPDS基因的相对表达量均为花瓣＞唇瓣＞蕊柱.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴建设		25	118	7.0	10.0
2	黄敏玲		41	191	8.0	12.0
3	林榕燕		9	5	1.0	2.0
4	樊荣辉		15	0	0.0	0.0
5	钟淮钦		20	12	3.0	3.0