具有抑制糖苷酶和胰蛋白酶双重活性的亚麻多肽的大肠杆菌重组表达及其活性分析

• 作者: 吴莎莎 王蕾 石亚伟
• 来源期刊: 山西大学学报（自然科学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 重组LUTI 突变 胰蛋白酶抑制剂 α-葡萄糖苷酶抑制剂 圆二色谱
• 年，卷（期）: 2018,（1）
• 所属期刊栏目: 生命科学与环境科学
• 页码范围: 213-219
• 页数: 7页
• 分类号: R977.3
• 字数: 4960字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13451/j.cnki.shanxi.univ(nat.sci.).2018.01.032

摘要

亚麻胰蛋白酶抑制剂(Linum usitatissimum L.LUTI)是亚麻中一种兼具胰蛋白酶抑制剂和α-葡萄糖苷酶抑制剂双重活性的多肽.文章将LUTI基因连接在pGEX-6p-1载体上获得重组载体pGEX-6p-1-LUTI,转化至大肠杆菌菌株E.coliBL21(DE3)表达,经GST-Sepharose4B、Prescission Protease酶切GST标签、SephacrylS200凝胶层析,获得分子量大小为8 kDa电泳纯的重组LUTI(rLUTI).经抑制活性测定,相比天然的LUTI,rLUTI对胰蛋白酶和α-葡萄糖苷酶抑制活性明显提升.二硫键存在与否对两种酶的抑制活力均有影响.利用定点突变技术获得rLUTI的C4/A,C49/A,C4、49/A突变体,进一步双酶抑制活性及CD结构分析显示,rLUTI的C4/A、C49/A及C4、49/A突变体对胰蛋白酶抑制活性影响尤为明显,α-葡萄糖苷酶的抑制活性略微下降;其中rLUTI的C49/A及C4、49/A突变体完全丧失了对胰蛋白酶的抑制活性.C4/A的突变对rLUTI的二级结构影响最为明显,导致α螺旋结构含量的降低.以上结果表明rLUTI第4位氨基酸Cys是影响其二级结构的关键位点,第49位氨基酸Cys则在维持其双酶抑制活性上发挥着重要作用,特别在胰蛋白抑制活性方面尤为突出.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王蕾	山西大学生物技术研究所教育部化学生物学与分子工程重点实验室	6	16	2.0	3.0
2	石亚伟	山西大学生物技术研究所教育部化学生物学与分子工程重点实验室	33	84	5.0	7.0
3	吴莎莎	山西大学生物技术研究所教育部化学生物学与分子工程重点实验室	1	1	1.0	1.0