Ⅱ型登革病毒NS1蛋白的表达及其免疫血清的制备

• 作者: 丛聪 代云见 刘兰军 康庄 张勇侠 李桂华 李立 罗心梅 陈宗香 高雅丽
• 来源期刊: 微生物学免疫学进展
• 学科: 医学
• 关键词: 登革病毒 NS1蛋白 原核表达 免疫荧光
• 年，卷（期）: 2018,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 7-13
• 页数: 7页
• 分类号: R373.3+3
• 字数: 5067字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13309/j.cnki.pmi.2018.05.002

摘要

目的 原核表达、纯化II型登革病毒NS1A蛋白(NS1蛋白1～180氨基酸即DENV2 NS1A),将其免疫动物制备免疫血清并鉴定.方法 构建重组融合质粒pET22b-p64K-L-DENV2 NS1A,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG低温诱导表达.表达的融合蛋白经Hitrap Talon crude柱亲和层析纯化后,免疫雌性日本长耳兔获得抗DENV2 NS1A兔抗血清,用Western blot和免疫荧光检测免疫血清对重组麻疹病毒MV(S191)-DENV2 NS16Xhis的识别和结合特性.结果 重组融合质粒pET22b-p64K-L-DENV2 NS1A经双酶切和测序证明构建正确.表达的重组融合蛋白相对分子质量为100000,纯化后蛋白纯度在85％以上,免疫获得的抗DENV2 NS1A兔抗血清可识别重组病毒MV(S191)-DENV2 NS16XHis表达的DENV2 NS1蛋白.结论 原核表达并纯化了DENV2 NS1A蛋白,建立了基于NS1蛋白的重组病毒MV(S191)-DENV2 NS16XHis的Western blot和免疫荧光检测方法,为登革热疫苗研制中重组病毒MV(S191)-DENV2 NS16XHis的质检奠定了基础.