荷包猪SLA-2-HB01真核表达载体的构建及在PK15细胞中的表达

• 作者: 姜平 张宗辉 李文哲 翟晓鑫 许崇波 高凤山 高花
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 荷包猪 PK15细胞 SLA-2 真核表达载体
• 年，卷（期）: 2018,（12）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 132-139
• 页数: 8页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2018-0695

摘要

为构建荷包猪SLA-2-HB01真核细胞表达载体,观察其在PK15细胞中的表达情况.首先参考SLA-2-HB01基因编码区序列设计了引物对,以SLA-2-HB01-pMD 18-T为模板PCR扩增获得SLA-2-HB01编码区基因片段,经TA克隆及菌落PCR筛选得到阳性克隆菌.测序正确后大量双酶切回收目的基因片段并与真核表达载体pEGFP N3相连接获得重组质粒SLA-2-HB01/pEGFP N3,重组质粒转化至大肠杆菌经大量克隆后,抽提阳性重组质粒并通过脂质体介导转染至PK15细胞,通过荧光显微镜观察转染后PK15细胞的荧光强度,进一步通过Western Blotting检测PK15细胞中SLA-2-HB01蛋白的表达情况.结果显示PCR成功扩增得到SLA-2-HB01,大小为1 104 bp,并成功构建重组质粒SLA-2-HB01/pEGFP N3,酶切鉴定证实插入片段大小为1 092 bp.SLA-2-HB01/pEGFP N3重组质粒转染PK15细胞后具有绿色荧光,Western Blotting显示SLA-2-HB01-EGFP融合蛋白分子量大小为70 kD,与理论值相符.成功构建了SLA-2-HB01/pEGFP N3重组质粒,并初步确认SLA-2-HB01-EGFP融合蛋白成功在PK15细胞中表达,为下一步进行SLA-2-HB01递呈多肽表位的研究奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	高凤山	大连大学生命科学与技术学院	60	358	10.0	16.0
2	李文哲	大连医科大学基础医学院	11	54	3.0	7.0
3	许崇波	韶关学院英东生命科学学院粤北生猪生产及疫病防控协同创新发展中心	12	2	1.0	1.0
4	高花	大连大学生命科学与技术学院	6	5	1.0	2.0
5	翟晓鑫	大连大学生命科学与技术学院	7	7	1.0	2.0
6	张宗辉	大连大学生命科学与技术学院	5	1	1.0	1.0
7	姜平	大连大学生命科学与技术学院	5	17	2.0	4.0