高效构建卵清白蛋白scFv噬菌体文库及其筛选

• 作者: 何麒麟 余琳 杨希 葛良鹏 郎巧利
• 来源期刊: 中国生物工程杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 鸡卵清蛋白 scFv 噬菌体展示 真核表达
• 年，卷（期）: 2018,（11）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 25-31
• 页数: 7页
• 分类号: Q816
• 字数: 4048字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13523/j.cb.20181104

摘要

目的:建立一种高效噬菌体文库构建方法,获得抗鸡卵清蛋白(ovalbumin,OVA)的单链抗体(scFv)噬菌体展示文库,筛选鉴定获得OVA单链抗体.方法:用OVA蛋白免疫Balb/C小鼠,选取血清抗体效价高的小鼠提取脾脏RNA,利用RT-PCR方法扩增获得小鼠重链和小鼠轻链基因.通过无缝连接酶一步将小鼠重链基因、轻链基因和linker DNA连接起来,插入噬菌体表达载体中,构建OVA scFv噬菌体展示文库.测定文库容量,对文库进行富集筛选,ELISA鉴定阳性克隆,测序后构建真核表达载体,转入Expi-CHO悬浮细胞进行真核表达,利用Western blot进行鉴定.结果:成功获得库容量为1.2×107cfu的OVA scFv噬菌体展示文库,并从中筛选出8个阳性克隆,选取效价最高的2号克隆,在Expi-CHO悬浮细胞中表达获得可溶性抗体.结论:建立了一种高效构建scFv噬菌体文库的方法,筛选获得高结合活性的OVA单链抗体,并成功进行了真核表达,为OVA ELISA检测试剂盒的研制奠定了基础.