2型猪链球菌磷酸甘油酸激酶基因的克隆表达及酶活性测定

• 作者: 丁晨曦 潘秀珍 王长军 胡丹 郭晓璐 陈家锋 龚秀芳
• 来源期刊: 中国生物工程杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 2型猪链球菌 磷酸甘油酸激酶 克隆表达 酶活性
• 年，卷（期）: 2018,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 16-23
• 页数: 8页
• 分类号: Q819
• 语种: 中文
• DOI: 10.13523/j.cb.20180303

摘要

目的:克隆表达2型猪链球菌中磷酸甘油酸激酶(PGK)并对其酶学特性进行测定.方法:采用PCR方法从05ZYH33基因组中扩增出pgk片段,构建重组表达质粒pET28a:pgk,经双酶切及测序验证正确的质粒转化入E.coli BL21(DE3)中进行IPTG诱导表达,重组PGK蛋白经SDS-PAGE和质谱鉴定并测定其酶学活性.结果:PGK在大肠杆菌中可溶性表达,纯化后得到约43kDa的重组PGK蛋白,其酶促反应最适温度为25℃,最适pH为7.5,2型猪链球菌PGK的酶活性为75U/ml,PGK相对于3-PGA的Km值为1.744mmol/L,Vmax为0.143mmol/(L·min),相对于ATP的Km值为2.266mmol/L,Vmax为0.318mmol/(L·min).结论:利用原核表达系统成功地表达了2型猪链球菌中的PGK,并获得了活性较好的重组PGK,酶学检测发现纯化的PGK具有良好的体外活性,为进一步研究该病在2型猪链球菌致病及代谢机制奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王长军	中国药科大学生命科学与技术学院	134	625	12.0	17.0
3	潘秀珍		80	452	10.0	17.0
4	胡丹		22	39	3.0	5.0
5	丁晨曦		6	12	2.0	3.0
6	龚秀芳		10	13	3.0	3.0
7	陈家锋		3	0	0.0	0.0
8	郭晓璐	中国药科大学生命科学与技术学院	3	0	0.0	0.0