番茄花柄脱落过程的酵母双杂交cDNA文库构建

• 作者: 付欣 史自航 姜赟 张璐 成丽娜 李天来 葛思琪 许涛
• 来源期刊: 沈阳农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 番茄 SMART技术 酵母双杂交 cDNA文库 脱落 花柄离区
• 年，卷（期）: 2018,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 129-135
• 页数: 7页
• 分类号: S625.2
• 字数: 5738字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-1700.2018.02.001

摘要

为进一步阐明脱落的分子机理,采用SMART(switching mechanism at 5' end of the RNA transcript)技术,在酵母菌株Y187中构建番茄花柄脱落过程的酵母双杂交cDNA文库.以中蔬6号番茄花柄为试材,选取其不同脱落阶段的离区,提取总RNA,利用SMART技术合成双链cDNA,产物经CHROMA SPINTM+TE-400柱纯化后,与载体pGADT7-Rec共转化入酵母菌Y187感受态中,在缺少亮氨酸的培养基(SD-Leu with agar)上培养收集所有克隆.经鉴定,cDNA文库的转化效率为5.6×106cfu?μg-1,文库容量为2.4×107cfu,文库滴度为4.9×108cfu?mL-1,平均插入片段长度大于1000bp,重组率为100%.随机挑取20个单克隆测序,比对NCBI数据库分析获得了19个已知蛋白序列和1个未知蛋白序列.已知功能的序列编码的蛋白分为4类,包括酶类蛋白、转录因子、载体蛋白和逆境响应蛋白,参与蛋白质磷酸化、水分运输和氧化还原反应等生物过程,其中7个序列之前被报道参与脱落.结果表明获得该文库质量较高,为筛选番茄花柄脱落过程中的互作蛋白奠定了基础.