乳酸脱氢酶B基因的克隆及其活性分析

• 作者: 刘婕 叶天星 张学武 程龙
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 医学
• 关键词: 乳酸脱氢酶类 克隆 真核表达 肿瘤细胞
• 年，卷（期）: 2018,（9）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 684-688
• 页数: 5页
• 分类号: Q786|R735.7
• 字数: 4188字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7644/j.issn.1674-9960.2018.09.009

摘要

目的 构建带Flag标签的乳酸脱氢酶B(lactate dehydrogenase B,LDHB)基因的真核表达载体,鉴定其表达产物的生物学活性.方法 采用PCR技术从人乳腺文库扩增LDHB基因,将其克隆到pCDH-EF1-MCS-T2A-puro载体中,酶切和测序验证后,转染人胚肾293 T细胞,通过蛋白质免疫印迹鉴定其表达;转染人肝癌HepG2细胞,采用酶和底物反应的方法检测乳酸含量,并通过生长曲线研究LDHB对肝癌细胞生长的影响.结果 将人乳腺文库扩增得到约1000 bp的cDNA片段克隆到pCDH-EF1-MCS-T2A-puro载体上,测序结果与目的序列完全一致;转染人胚肾293T细胞后,LDHB基因表达成功;乳酸含量测定结果显示,LDHB促进了肝癌细胞乳酸的生成;还可促进肝癌细胞的生长.结论 成功构建了pCDH-Flag-LDHB真核表达载体,表达的LDHB具有生物学活性,为进一步研究LDHB在低氧和肿瘤发生发展中的功能奠定了良好基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张学武	延边大学医学院	84	551	12.0	20.0
2	叶天星	延边大学医学院	1	0	0.0	0.0
3	刘婕	军事科学院军事医学研究院生物工程研究所	7	1	1.0	1.0
4	程龙	军事科学院军事医学研究院生物工程研究所	1	0	0.0	0.0